Thèses de Doctorat

Contribution à l’étude de la bio-activité de quelques plantes médicinales de la flore d’Algérie : cas de la famille des Lamiacées

Thu, 30 Jun 2022 00:00:00 GMT

Contribution à l’étude de la bio-activité de quelques plantes médicinales de la flore d’Algérie : cas de la famille des Lamiacées KHelfallah, Amina; Kebieche, M. (encadreur) Dans la présente étude, les extraits bruts et ses fractions de Satureja baborensis et celles d’Origanum floribundum ont été soumis à une investigation phytochimique, à l’étude « in vitro » de leur pouvoir antioxydant et inhibiteur de α-glucosidase d’une part et leur activité « in vivo » antidiabétique et hépatoprotectrice d’autre part. Les résultats des méthodes colorimétriques montrent que les différents extraits sont riches en composés phénoliques et en flavonoïdes. L’analyse par CPG/MS montre 52 et 30 molécules bioactives pour respectivement l’extrait brut d’O. floribundum et celui de S. baborensis. L’activité inhibitrice du radical DPPH, ABTS et le pouvoir réducteur du cuivre (test CUPRAC) et du fer des différents extraits des deux plantes d’étude est intéressante et dose dépendante. L’activité inhibitrice de l’α-glucosidase exercée par les différents extraits des deux plantes de l’étude est aussi prometteuse. En outre, l’évaluation « in vivo » de l’activité antidiabétique en subchronique de l’extrait brut lyophilisé de S. baborensis et de la fraction aqueuse d’O. floribundum chez les rats diabétiques type 2 induits par STZ/nicotinamide nous a permis de prouver pour la première fois ses effets hypoglycémiants et antidiabétiques. Quelques mécanismes hypoglycémiants ont été dévoilés dans cette étude. En effet, les deux lamiacées de l’étude exercent des effets antidiabétiques extra-pancréatiques indépendants de la sécrétion de l’insuline (O. floribundum). Elles inhibent le processus de la néoglucogenèse, principal mécanisme physiopathologique du diabète type 2 en dépassant la capacité de la metformine, le seul médicament connu pour cet effet. Ce résultat est prouvé par la détermination de l’expression génique du transporteur du glucose glut-2 hépatique. Les deux lamiacées augmentent aussi le métabolisme glucidique par l’élévation de l’expression génique de la glucokinase, première enzyme du métabolisme intracytoplasmique du glucose. Cette amélioration pourrait être due aux effets insulino-mimétiques des molécules bioactives de S. baborensis et d’O. floribundum. Les deux plantes de l’étude montrent aussi un effet hypolipidémiant, hépatoprotecteur et antioxydant dans le foie et le pancréas des diabétiques type2. En termes de l’activité hépatoprotectrice « in vivo », les deux extraits bruts des lamiacées de l’étude ont un pouvoir hépatoprotecteur en aigue contre les dommages du paracétamol (APAP) en normalisant la fonction hépatique d’un point de vue biochimique et histologique. Quelques mécanismes moléculaires hépato-protecteur ont été dévoilés tels que l’inhibition de l’oxydation de l’APAP en radicaux libres particulièrement le NAPQI et les effets anti-inflammatoires en inhibant l’expression génique de deux gènes cyp2e1et nf-kb hépatiques déterminés par la technique d’RT-PCR. Les deux plantes d’études exercent également un pouvoir antioxydant simultanément dans le cytoplasme et les mitochondries du foie.

Etude des risques de potentialisation des effets prooxydants du Férulénol et des médicaments anticancéreux en cas d’association aux activateurs enzymatiques sur tumeurs Expérimentales et tissus sains

Mon, 01 Jan 2018 00:00:00 GMT

Etude des risques de potentialisation des effets prooxydants du Férulénol et des médicaments anticancéreux en cas d’association aux activateurs enzymatiques sur tumeurs Expérimentales et tissus sains BOUSSENANE, Hanane Nadia; LAHOUEL, Mesbah (encadreur) Notre étude mené chez les rats souche Wistar et qui consiste à chercher le risque de potentialisation de l’effet prooxydant du Ferulénol et du cyclophosphamide après assocciation à l’inducteurs enzymatique sur tumeurs expérimentale et tissussains, nous a permis de lancer plusieurs expériences, chacune d'elle, nous a rapporté des résultats non négligeables : L’aministation d’une dose unique de 100 mg/kg de benzo(a)pyrène induit le cancer pulmonaire chez les rats. Le cancer pulmonaire est associé au stress oxydatif, par une synthèse énorme de ROS conduisant à une inflammation et une transformation maline du tissu pulmonaire. le Férulenol a un effet pro-oxydant à la dose 50 mg/kg. Il engendre une surproduction de l’O2°, du MDA, et décroit l’activité des enzymes antioxydante. le Férulenol, en le comparant aux cyclophosphamide , est plus toxique aussi bien sur les cellules tumorale ,ce qui est bénéfique en thérapie anticancéreuse, que sur les cellues saines, il a perturbé le potentiel membranaire de la mitochondrie, chose qui aboutit sans doute a une mort cellulaire programmée. l'extrait de propolis, riche en composants flavonoïdes, est capable de restaurer la perturbation du potentiel membranaire induite par le composé découplant naturel Ferulénol , en interagissant avec la chaîne respiratoires mitochondriales, qui inhibe l'oxydation des pores thiols de transition de perméabilité et empêche son ouverture. Donc, l'extrait de propolis pourrait être un agent thérapeutique prometteur assurant une protection des cellues saine contre plusieurs agents chimiopharmaceutiques , en corrigeant la toxicité des agents actifs utilisés dans le traitement du cancer. L’activateur enzymatique (phénobarbital), lors de son administration chez le rat en association au Férulenol ou au cyclophosphamide a encore accru la production de l’anion superoxyde et du MDA, mais paradoxalement, diminue le taux du gonflement mitochondrial, et augmente l’activité enzymatique de la catalase. Pour conclure, nous pouvons donc dire que la mort cellulaire programmée est au centre de nombreuses stratégies thérapeutiques anticancéreuses. Il reste malgré tout dans de nombreux cas des problèmes de toxicité envers les cellules saines. C’est pourquoi la poursuite des études visant à comprendre les mécanismes particuliers mis en place par Conclusion 84 les cellules cancéreuses pour échapper à l’apoptose, est une des priorités de la recherche pharmacologique. On peut conclure que le phénobarbital, inducteur enzymatique peut participer a l’induction des enzymes antioxydantes, comme il peut augmenter la production des ROS par l’activation des CYPs mitocondriaux. Ces résultats sont très encourageants et permettent non seulement de déterminer de nouvelles cibles thérapeutiques mais ils mettent également en évidence l’importance de l’état de l'activité mitochondriale dans l’efficacité des agents anti tumoraux en association aux inducteurs enzymatiques ciblant la production de ROS mitochondriaux.

Metformin: a potential risk for Mg2+ transport disorders and hypomagnesemia in type 2 diabetes

Sat, 14 May 2022 00:00:00 GMT

Metformin: a potential risk for Mg2+ transport disorders and hypomagnesemia in type 2 diabetes Hacene, Bouras; Mohamed, Kebieche (encadreur) Background/Aims: Metformin is the first-line treatment in T2D. Previously and recently, it has been shown that metformin treatment is associated with lower serum Mg2+ levels in T2D patients. To confirm this association and to investigate how metformin affects Mg2+ homeostasis, human, in vitro and in vivo studies were performed. Methods: A cohort of T2D patients, diabetic mice housed in metabolic cages, mouse DCT15 kidney cells, human Caco-2 colon cells and TRPM6-transfected HEK293 cells were included in this study. Plasma and urinary Mg2+ concentrations were measured using a spectrophotometric assay. In the human study, variables were correlated to plasma Mg2+ levels and to FEMg by using Pearson correlation analyses. After excluding confounding variables, all parameters correlating (p < 0.1) with plasma Mg2+ or with FEMg were included in a stepwise backward regression model. Whole-cell patch clamp recordings and cell surface biotinylation assays were performed to study short-term (1 h) metformin treatment in TRPM6-transfected HEK293 cells. Long-term (24 h) treatment of mouse DCT15 kidney cells and human Caco-2 colon cells with metformin was applied to measure the effects on endogenous TRPM6 mRNA expression and on Mg2+ uptake. mRNA expression of magnesiotropic genes was determined using RT-qPCR. To assess Mg2+ absorption, 25Mg2+ uptake measurements were performed using inductively coupled plasma mass spectrometry. Results: In the cohort of T2D subjects, the mean plasma Mg2+ concentration and the mean FEMg were 0.74 ± 0.10 mmol/L and 4 ± 3% respectively. 30.6% of patients suffered from hypomagnesemia (blood [Mg2+] < 0.7 mmol/L) and 77% showed renal Mg2+ loss (FEMg > 2%). In the patients with T2D, the use of metformin (n = 251, 62%) was associated with lower plasma Mg2+ concentrations (r = −0.268, p < 0.001) and a lower FEMg (r = −0.278, p < 0.001). Short-term effects of metformin significantly increased TRPM6 activity and its cell surface trafficking. In contrast, long-term effects significantly decreased TRPM6 mRNA expression and Mg2+ uptake in the colon and DCT. Db/db mice had significantly lower serum Mg2+ levels than db/m mice. However, metformin-treatment of mice did not result in effects on the serum Mg2+ concentration, urinary Mg2+ excretion and gene expression levels. Conclusion: Indeed, metformin therapy is strongly associated with reduced serum Mg2+ levels in patients with T2D. The prolonged use of metformin may lower serum Mg2+ concentrations through downregulation of TRPM6 gene expression, which in turn, could lead to modulation of Mg2+ (re)absorption in the intestine and kidney. Therefore, metformin-treated patients with type T2D are at risk for hypomagnesemia.

Altérations des cellules cérébrales et neurocomporetementales associées à l'exposition chronique aux pyréthrinoides et effets cytoprotecteurs de la quercétine

Wed, 01 Jan 2020 00:00:00 GMT

Altérations des cellules cérébrales et neurocomporetementales associées à l'exposition chronique aux pyréthrinoides et effets cytoprotecteurs de la quercétine Beghoul, Afafe; Kebieche, Mohamed (encadreur) Les maladies neurodégénératives sont d’une étiologie multifactorielle faisant intervenir des facteurs environnementaux, alimentaires et génétiques. Des études épidémiologiques et toxicologiques ont montré que la plupart de ces maladies sont associées à une exposition chronique aux produits phytosanitaires. Dans cette étude nous nous sommes intéressés à l’évaluation de la neurotoxicité due à l’exposition chronique à deux pyréthrinoïdes (PYRs), la bifenthrine (BF) et la deltaméthrine (DLT) seules ou en mixture sur un modèle animal (rats Wistaralbinos), femelles adultes d’une part et à l’étude de l’effet préventif et cytoprotecteur de la quercétine (QUER), contre cette toxicité d’autre part. L’approche expérimentale de la présente étude est divisée en trois axes ; le premier axe consiste à l’étude du statut redox mitochondrial dans les différentes régions du cerveau en l’occurrence l’hippocampe, le striatum, le cervelet et le cortex cérébral et l’intégrité structurale des mitochondries, chez le rat exposé chroniquement aux PYRs ; le deuxième axe s’intéresse à l’évaluation du stress oxydatif cytosolique -régional afin de mettre en évidence le degré et la portée du déséquilibre redox dans les autres compartiments cellulaires à savoir le cytosol au-delà des mitochondries ; et finalement l’étude neurocomportementale afin de mettre en évidence la portée des altérations sur les facultés cognitives et comportementales de l’animal. Les résultats obtenus dans cette étude ont montré une neurotoxicité induite par les deux PYRs utilisés (BF et DLT), à travers la perturbation du statut redox dans les mitochondries et le cytosol, phénomène ayant provoqué un gonflement mitochondrial qui est susceptible d’altérer l’intégrité fonctionnelle et structurale de cette organelle. En effet, l’évaluation du stress oxydatif a révélé d’importants effets toxiques des deux PYRs se manifestant via une augmentation du taux du malondialdéhyde (MDA) cytosolique et mitochondrial ; une diminution de l’activité enzymatique de la catalase (CAT) mitochondriale et cytosolique sauf dans le striatum où il y a une augmentation suite à l’exposition à la DLT ; le taux de glutathion (GSH) augmente dans le cytosol du cervelet, du striatum et diminue dans les mitochondries du cortex et du cervelet et s’altère significativement dans les autres régions. L’activité de la superoxyde dismutase (SOD) cytosolique s’induit par les PYRs dans toutes les régions ; l’activité de la glutathion-s-transférase (GST) diminue dans les mitochondries et le cytosol de l’hippocampe et s’altère dans le cytosol des autres régions ; l’activité de la glutathion peroxydase (GPX) est altérée dans le cytosol et l’hippocampe et est induite dans le cytosol des autres régions. Les tests neurocomportementaux révèlent surtout chez le groupe DLT : une hypomotricité, une altération de la mémorisation spatiale et non spatiale provoquée, une installation d’un état d’anxiété, une dépression évaluée par le test de sucrose. Sur un autre plan, nous avons évalué les effets préventifs de la QUER sur les paramètres étudiés après le traitement par les PYRs. Les résultats ont démontré que la QUER diminue le taux de MDA cytosolique, elle élimine l’altération des enzymes antioxydants provoquée par la DLT et la mixture, mais non de la BF. Sur le plan neurocomportemental, la QUER a un effet antidépressif, améliore le déficit locomoteur, la mémorisation et l’apprentissage et réduit le niveau d’anxiété